许兰兰;黄曦;李昆志;陈丽梅;黄庶识;

广西科学院生物物理实验室;昆明理工大学生物工程技术研究中心;广西大学农学院;

海洋真菌;;荔枝;;霜疫霉菌;;炭疽病菌;;防治效果

从广西北部湾红树林区的近海海底沉积物与海水样品中分离出64株海洋真菌,以荔枝霜疫霉菌Peronophythora litchii和荔枝炭疽病菌Colletotrichum gloeosporioides为拮抗对象,发现有8株菌株对病原菌菌丝生长有较强的抑制作用,其中菌株MF-3、MF-13、MF-15和MF-16的发酵滤液对荔枝霜疫霉菌的抑制效果较好,菌丝生长抑制率达到94%以上;菌株MF-3和MF-16的发酵滤液对荔枝炭疽病菌抑制效果较好,菌丝生长抑制率均在70%以上。用菌株MF-3、MF-6、MF-8、MF-13和MF-9的发酵滤液进行荔枝离体果防病保鲜试验,结果表明常温下保鲜处理2~4d后,鲜果的褐变指数小于对照组,其中菌株MF-9防褐变效果最好。在26~32℃下,用5株菌的发酵滤液分别浸泡鲜果1d后接种荔枝霜疫霉,3d后菌株MF-6、MF-8、MF-9和MF-13处理的发病率分别是68.3%、71.67%、66.18%和80%,显著低于对照组的87.2%和烯酰玛琳的84.2%(P<0.05),能推迟鲜果晚发病1d。接种炭疽菌3d后,菌株MF-6处理的发病率仅为64.44%,与多菌灵(62.76%)和代森锌(62.54%)效果相当。形态学观察结合分子鉴定,确定菌株MF-3、MF-6、MF-8、MF-9和MF-13分别为布雷正青霉Eupenicillium brefeldianum、微紫青霉Penicillium janthinellum、阿达青霉Penicillium adametzii、草酸青霉Penicillium oxalicum和短棒曲霉Aspergillus clavatonanicus。

Screening of Marine Antagonistic Fungi and Their Control Efficiency on Downy Mildew and Anthracnose Diseases of Harvested Litchi Fruit

XU Lan-lan1,2,HUANG Xi3,LI Kun-zhi2,CHEN Li-mei2,HUANG Shu-shi1,2* (1.Biophysics Laboratory,Guangxi Academy of Sciences,Nanning 530007;2.Biotechnology Research Center,Kunming University of Science and Technology,Kunming 650224;3.Agriculture Academy of Guangxi University,Nanning 530007,China)

Sixty-four strains of marine-derived fungi were isolated from the sediment and seawater collected from mangrove forest in Beibu Bay in China.Eight strains were demonstrated to be inhibitive against mycelial growth of both Peronophythora litchii and Colletotrichum gloeosporioides.Fermentation filtrate of the strains MF-3、MF-13、MF-15 and MF-16 had high inhibition activity against mycelial growth of P.litchii by over 94% inhibitory rate,and the strains MF-3 and MF-16 could restrain mycelial growth of C.gloeosporioides by over 70%.Fruit preservation experiments demonstrated that browning index of the Lichi fruit treated by the fermentation filtrate of the five strains MF-3,MF-6,MF-8,MF-13 and MF-95 was lower than that of CK,and the strain MF-9 was the best on prevention of fruit browning.When Lichi fruits were immersed in the fermentation filtrate of MF-6、MF-8 and MF-9,separately,for 1 d and then inoculated with P.litchii, disease incidence was 68.3%,71.67% and 66.18%,respectively,after 3 d, significantly lower than that of control(87.2%) or dimethomorph treatment(84.2%)(P<0.05).The onset of fruit putrefaction could be postponed 1 d in comparison with CK.After 3 d of inoculation with C.gloeosporioides,disease incidence could be reduced to 64.44% by MF-6 treatment,without significant difference from that of zineb(62.54%) or badistan(62.76%) treatment.According to morphological and molecular characteristics,strain MF-3、MF-6、MF-8、MF-9 and MF-13 were identified as Eupenicillium brefeldianum,Penicillium janthinellum,Penicillium adametzii,Penicillium oxalicum and Aspergillus clavatonanicus,respectively.

marine fungi;Litchi chinensis Sonn.;Peronophythora litchii; Colletotrichum gloeosporioides;control efficiency

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国家自然科学基金(30860010);; 广西科学基金项目(桂科回0832006);; 广西科研院所基本科研业务费资助项目(08YJ16WL01);; 广西留学人员科技活动项目(桂人函[2008]987号)

1 材料与方法 1.1 供试菌株、培养基、果实及药剂 1.2 海洋真菌的分离与纯化 1.3 拮抗真菌的筛选 1.3.1 拮抗真菌的初筛 1.3.2 复筛 1.4 鲜果抗菌活性试验 1.5 拮抗菌株的鉴定 1.5.1 形态学观察 1.5.2 分子鉴定 2 结果与分析 2.1 海洋拮抗真菌的分离、初筛以及复筛结果 2.2 海洋拮抗真菌发酵滤液对荔枝鲜果的防病保鲜作用 2.2.1 海洋拮抗真菌发酵滤液及化学杀菌剂对鲜果褐变的抑制效果 2.2.2 海洋拮抗真菌发酵滤液对荔枝霜疫霉菌的抑制效果 2.2.3 海洋真菌发酵滤液对炭疽菌的抑制效果 2.3 5株拮抗菌的鉴定结果 2.3.1 形态学特征 2.3.2 分子鉴定 3 讨论

AGRI1106S5

0

中国生物防治学报

Chinese Journal of Biological Control

ZSWF

2011

02

11-5973/S

2095-039X

ZSWF201102012

72-78

S436.67

D046;D048;

62;73;

荔枝Litchi chinensisSonn.是著名的亚热带水果和重要的亚热带经济作物。广西作为我国荔枝主产区,具有得天独厚的发展荔枝生产的自然条件。据统计,广西荔枝产量约占全国总产量的32%,所以荔枝产业在广西水果产业中占有重要地位[1]。在广西,荔枝的收获季节处于高温高湿时期,容易造成采后鲜果的大量腐烂损耗。而荔枝果的腐烂主要由荔枝霜疫霉Peronophythora litchiiChenexKoet al和荔枝炭疽ColletrichumgloeosporiodesPenz等病原菌引起[2~4]。目前,荔枝的防腐保鲜剂主要是化学杀菌剂,均有不同程度的毒性和残留。因此寻求安全、无毒高效杀菌剂,对于促进荔枝产业的健康发展尤为重要。为了研究与开发荔枝病害的生物抑菌剂,作者从广西北部湾海域取样进行海洋真菌的分离、筛选并进行抑菌研究,筛选到5株抑菌活性较强的海洋真菌,并研究其对荔枝霜疫霉和炭疽病的防效。现将结果报道如下。1材料与方法1·1供试菌株、培养基、果实及药剂海洋真菌:第一批样品采自广西钦州沙井港附近海域,有6个海泥样品;第二批样品采自广西钦州港红树林下的海泥和海水样品。荔枝霜疫霉菌株和荔枝炭疽病菌株均来自华南农业大学资源环境学院。海洋真菌分离培养基:50%无菌海水Martin培养基,并添加链霉素(50μg·mL-1);抗真菌活性试验用培养基和指示菌培养基:PDA培养基;发酵培养基:50%无菌海水PD培养液。丁香荔,市售新鲜荔枝,购于广西南宁市五里亭蔬果批发市场,选择成熟度(转色期)和大小一致、无机械损伤、无病虫害的为供试果实。50%多菌灵稀释1200倍(carbendazim sulfur,山东省潍坊市农药实验厂)、65%代森锌稀释1200倍(标正作物科学有限公司)、75%百菌清稀释1000倍(chlorothalonil,广州市顾地丰农药有限公司)、80%烯酰吗啉稀释5000倍(陕西标正作物科学有限公司),均用去离子水配制。1·2海洋真菌的分离与纯化用无菌PBS溶液梯度稀释法稀释样品,然后分别取200μL涂布分离培养基平板,挑取单个菌落进行纯化,培养、编号后,接种到斜面培养基上,待长好后置于4℃冰箱保存。1·3拮抗真菌的筛选1·3·1拮抗真菌的初筛采用平板对峙法进行初筛,供试菌为荔枝炭疽病菌和荔枝霜疫霉病菌,计算抑制率,选取抑制率高的目标菌株进行复筛。抑制率=(对照真菌生长面积-拮抗作用后真菌生长面积)/对照真菌生长面积×100%。1·3·2复筛(1)发酵滤液的制备:分离出的海洋真菌接种到5mL 50%海水PD培养基中,28℃活化2d,随后加入新鲜的发酵培养基15mL,28℃、180r·min-1振荡培养13d;发酵液4℃、9000 r·min-1离心10min,上清液经0·22μm滤膜过滤,备用。(2)发酵滤液的抗菌试验:1mL发酵滤液与9mL培养基混匀后制成平板,取直径6mm的菌块(于PDA平板28℃培养4d)菌面朝下置于平板上,28℃培养48h,十字交叉法测定抑菌圈直径。1mL H2O加入9mL培养基作对照。每处理设3次重复,计算抑制率。1·4鲜果抗菌活性试验参照蔡学清等[5]方法,用筛出的5株抗菌活性强的菌株MF-3、MF-6、MF-8、MF-13和MF-9的发酵滤液进行荔枝离体果的防病保鲜试验。挑选大小均匀、无病斑的新鲜荔枝,分别在不同发酵滤液中浸泡5min,取出,直至液滴不再滴下,放入保鲜袋中;以灭菌蒸馏水和化学杀菌剂处理作对照;每处理各选荔枝30颗,设3次重复。发酵滤液浸泡鲜果1d后,喷雾接种荔枝霜疫霉菌和炭疽菌(10倍物镜下观察,每视野约为10个游动孢子囊),于室温(26~32℃)放置,每天观察荔枝发病情况,并分别计算病情指数、褐变指数、防治效果及发病率。计算公式如下:①病情指数=∑(病情级数×果数)/(总果数×最高级值)×100。病情级数:0级,无病斑;1级,病斑面积占整个果面积的5%以下;3级,病斑面积占整个果面积的6%~15%;5级,病斑面积占整个果面积的16%~25%;7级,病斑面积占整个果面积的26%~50%;9级,病斑面积占整个果面积的50%以上。②褐变指数的测定参照文献[6]的方法。褐变指数=∑(褐变级数×果数)/总果数。褐变级数的确定:1级果为全红,2级果为果皮轻微褐变,3级果为果皮褐变面积占5%~25%,4级果为果皮褐变面积占26%~50%,5级果为果皮褐变面积大于50%。③防治效果=(对照病情指数-处理病情指数)/对照病情指数×100%。④发病率=发病果数/总果数×100%。1·5拮抗菌株的鉴定1·5·1形态学观察采用载片湿室培养法[7]培养真菌,显微观察其形态,并结合点植培养法观察[8]。1·5·2分子鉴定将真菌孢子接种到PDA平板上,28℃活化培养2~3d。从平板上打取菌饼接种至液体PDA培养基,28℃、180 r·min-1振荡培养5~7d,真空抽滤,收集干燥菌丝。改良CTAB法提取真菌总DNA,DNA纯化后采用通用引物ITS4(5-’TCCTCCGCTTATTGATATGC-3’)和ITS5(5-’GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGG-3’)PCR扩增真菌rDNA的ITS片段。反应体系(25μL):10×buffer 2·5μL,15mmol·L-1MgCl22μL,dNTP2μL,引物各1μL,TaqDNA聚合酶0·5μL,真菌DNA原液1μL,无菌重蒸水补足至25μL。反应条件:95℃预变性2min;95℃变性30s,52℃复性30s,72℃延伸1·5min,循环30次;72℃延伸10min。扩增产物经电泳检测后,由北京三博远志生物技术有限责任公司进行纯化和序列测序,测序引物为ITS5。将测定的基因序列于GenBank注册,并与GenBank中已有基因序列进行BLAST分析,选择与所测菌株的ITS基因序列相似性最大的20条序列,采用ClustalX和MEGA(4·1)软件进行序列的比较,用Neighbor-joining法构建系统进化树。2结果与分析2·1海洋拮抗真菌的分离、初筛以及复筛结果在分离平板上共分离到64株海洋真菌。利用平板对峙抑制法初筛,发现其中14株海洋真菌对荔枝病原真菌具有抑制作用。经过进一步筛选,发现有8株菌株抑制作用较强。利用其发酵滤液进行复筛,结果显示(表1),大多数菌株的发酵滤液对病原真菌的菌丝生长有抑制作用,其中菌株MF-3、MF-13、MF-15和MF-16对荔枝霜疫霉菌的抑制效果较好,菌丝生长抑制率达94%以上;其次是菌株MF-6和MF-8,抑制率达86%和66%。菌株MF-3和MF-16对荔枝炭疽菌抑制效果较好,菌丝生长抑制率均在70%以上。菌株MF-3、MF-15和MF-16对荔枝霜疫霉菌和荔枝炭疽菌都有较好抑制作用,具有一定的抗菌广谱性。表1海洋拮抗真菌发酵滤液对荔枝霜疫霉菌和炭疽病菌菌丝生长的影响Table 1 Effect of fermentation filtrate produced by marine-derived antagonistic fungi on mycelial growth ofP.litchiiandC.gloeosporiodes菌株Strains菌丝生长的抑制率(%)Inhibition rate of mycelia growth荔枝霜疫霉菌P.litchii荔枝炭疽病菌C.gloeosporioidesMF-3 94 75MF-4 17 51MF-6 86 15MF-8 66 28MF-9 15 8MF-13 98 25MF-15 94 56MF-16 96 73CK--2·2海洋拮抗真菌发酵滤液对荔枝鲜果的防病保鲜作用综合初筛和复筛的结果,选用5株真菌MF-3、MF-6、MF-8、MF-13和MF-9的发酵滤液进行鲜果抗菌活性试验,并用相应的化学杀菌剂作对照。2·2·1海洋拮抗真菌发酵滤液及化学杀菌剂对鲜果褐变的抑制效果常温下5株真菌发酵滤液和化学杀菌剂处理荔枝鲜果的保鲜试验(表2)结果表明,5株真菌中,MF-3、MF-6、MF-8和MF-9发酵滤液处理鲜果的褐变指数小于杀菌剂处理组,MF-13的效果与杀菌剂相当。其中MF-9菌株的效果最好,处理后2~4d,褐变指数均小于对照组和其它处理组,说明菌株MF-9的发酵滤液可延缓荔枝果皮变色,对荔枝果实保色护色有一定效果。表2 5株真菌发酵滤液对鲜果褐变的抑制效果Table 2 Inhibition effect of fermentation filtrate of 5 fungal strains on fruit browning处理Treatment褐变指数Browning index处理后2d2 d after treatment处理后3d3 d after treatment处理后4d4 d after treatmentMF-3 2·47 3·40 4·50 aMF-6 2·10 2·79 4·05 cMF-8 2·40 2·70 4·10 cMF-9 1·70 2·03 3·14 bMF-13 2·33 3·77 4·63 dCK 1·94 2·35 4·00 c多菌灵Badistan 3·57 5·11 4·63 d代森锌Zineb 3·32 4·15 4·75 d百菌清Chlorthalonil 3·01 3·91 4·64 d烯酰玛琳Dimethomorph 3·60 4·53 4·82 d注:同列数据后不同小写字母表示0·05水平上差异显著。下同。Note:Values followed by different letters in the same column are significantly different at 0·05 level.The same below.2·2·2海洋拮抗真菌发酵滤液对荔枝霜疫霉菌的抑制效果发酵滤液浸泡鲜果1d后接种荔枝霜疫霉菌,接种2d后,5株海洋真菌发酵滤液处理的发病率为36·67%~40%,显著低于对照组的70%和烯酰玛琳的67·91%(表3);接种3d后,菌株MF-6、MF-8和MF-9发酵滤液处理的发病率分别是68·34%、71·67%和66·18%,显著低于对照组的87·2%和烯酰玛琳的84·2%(P<0·05)。人工接种离体鲜果试验表明,在26~32℃下,与空白对照组相比,这5株菌的发酵滤液对荔枝鲜果的霜疫霉菌均有一定的抑制作用,能推迟鲜果发病大约1d。表3海洋真菌发酵滤液对离体荔枝果霜霉病的防治效果Table 3 Control efficiency of fermentation filtrate produced by marine-derived fungi on downy mildew of postharvest litchi fruit处理Treatment处理后2d 2 d after treatment处理后3d 3 d after treatment病情指数Disease index发病率(%)Disease incidence防效(%)Control efficiency病情指数Disease index发病率(%)Disease incidence防效(%)Control efficiencyMF-3 27·00 40·00 a 39 63·60 93·33 a-2MF-6 21·00 36·67 b 52 51·75 68·34 b 17MF-8 23·00 38·34 b 48 48·10 71·67 b 23MF-9 24·15 38·53 b 45 47·85 66·18 b 23MF-13 26·40 39·52 a 40 53·41 80·00 c 14CK 44·10 70·00 c-62·25 87·20 d-百菌清Chlorthalonil 10·08 18·20 d 77 17·70 32·20 e 72烯酰玛琳Dimethomorph 51·10 67·91 e-16 61·80 84·20 d 12·2·3海洋真菌发酵滤液对炭疽菌的抑制效果海洋真菌发酵滤液对离体荔枝果炭疽病的防效如表4所示,接种2d后空白对照组(CK)的发病率为40%,多菌灵处理为23·5%,代森锌处理25·64%,菌株MF-13和MF-6处理的发病率分别为36·67%和43·33%,与空白对照组的发病率相当。接种3d后,MF-6处理的发病率为64·44%,与多菌灵(62·54%)和代森锌(62·76%)处理无显著差异,明显低于空白对照组(90%)。多菌灵和代森锌是广谱性杀菌剂,对多种作物的真菌病害如霜霉病和炭疽病有较好防效,离体鲜果接种炭疽菌试验结果表明,MF-6菌株的发酵滤液对荔枝鲜果的炭疽菌抑制作用与多菌灵和代森锌相当。表4海洋真菌发酵滤液对离体荔枝果炭疽病的防治效果Table 4 Control efficiency of fermentation filtrate produced by marine-derived fungi on anthracnose of postharvest litchi fruits处理Treatment处理后2d 2 d after treatment处理后3d 3 d after treatment病情指数Disease index发病率(%)Disease incidence防治效果(%)Control efficiency病情指数Disease index发病率(%)Disease incidence防治效果(%)Control efficiencyMF-3 44·4 73·33-80 69·6 93·33 a 2MF-6 21·1 43·33 14 43·8 64·44 b 38MF-8 32·7 55·00-33 59·8 81·67 c 16MF-9 43·2 76·67-76 67·8 93·33 a 46MF-13 22·5 36·67 9 55·8 80·00 c 22CK 24·6 40·00-71·1 90·00 a-多菌灵Badistan 14·2 23·50 42 41·1 62·54 b 42代森锌Zineb 15·6 25·64 36 41·2 62·76 b 422·3 5株拮抗菌的鉴定结果2·3·1形态学特征采用载片湿室培养法观察5株海洋真菌的菌丝和分生孢子结构,发现:(1)菌株MF-3培养1d后,孢子萌发长出菌丝,3d后菌丝继续生长,4d后分生孢子结构开始出现;分生孢子梗发生于气生菌丝或表面菌丝,壁平滑,帚状枝通常单轮生,少有或偶有双轮生及不规则者;瓶梗2~5(-7)个,瓶状,梗颈明显;分生孢子呈现近球形或椭圆形,壁平滑;分生孢子链较疏松而不规则。(2)菌株MF-6培养3d后有大量分生孢子梗长出,其发生于基质或气生菌丝,帚状枝规则和不规则者同时存在,显著叉开,双轮生通常占优势;在梗基轮下常有梗基状分枝,也有单轮生或三轮生者,梗颈通常明显;分生孢子常为椭圆形或卵圆形,也有近球形者;分生孢子链通常疏松而不规则。(3)菌株MF-8培养3d后分生孢子梗成熟,分生孢子梗大多自基质生出,发生于气生菌丝者少;孢梗茎无囊状膨大或稍膨大,帚状枝单轮生,偶有梗基状分枝,瓶梗每轮4~6个,瓶状,梗颈通常较明显;分生孢子呈球形或近球形,小;分生孢子链较疏松,近于圆柱状或不规则。(4)菌株MF-9培养2d后有大量分生孢子梗长出,分生孢子长势好;培养3d后分生孢子梗成熟,多发生于基质,帚状枝常双轮生,偶有三轮生或单轮生,梗基每轮2~3(-4)个,彼此常贴紧;瓶梗每轮5~8个或更多,幼龄时呈瓶状至披针形,充分成熟时近圆柱状,梗颈通常明显;分生孢子呈典型椭圆形或长椭圆形,大,分生孢子链圆柱状或近于圆柱状。(5)菌株MF-13培养2d后在基质长出许多头状分生孢子结构;菌丝排列杂乱,分生孢子头棍棒状,分生孢子串生于小梗顶端,呈辐射状排列,分生孢子串排列较紧密;孢子梗无隔,顶端稍膨大,形成棍棒状顶囊。2·3·2分子鉴定5株海洋真菌经PCR扩增获得rDNA的ITS片段:MF-3为559bp、MF-6为548bp、MF-8为583bp、MF-9为589bp、MF-13为600bp。通过与GenBank的已知序列进行BLAST分析,发现菌株MF-3与布雷正青霉Eupenicillium brefeldianum有较高的同源性,其中与E.brefeldianumNRRL 710(AF033435)有99%的同源性;MF-6与微紫青霉Penicillium janthinellum有较高的同源性,其中与P.janthinellum(GQ241286)有99%的同源性;MF-8与阿达青霉Penicillium adametzii有较高的同源性,其中与P.adametzii(AF034459)有97%的同源性;MF-9与草酸青霉Penicillium oxalicum有较高的同源性,其中与Penicilliumsp.CCF3778(FJ430745)有98%的同源性;MF-13与短棒曲霉Aspergillus clavatonanicus有较高的同源性,其中与A.clavatonanicusNRRL4741(EF669986)有99%的同源性。结合形态学观察与分子鉴定的结果,5株海洋真菌鉴定如下:菌株MF-3为布雷正青霉,MF-6为微紫青霉,MF-8为阿达青霉,MF-9为草酸青霉,MF-13为短棒曲霉。3讨论海洋真菌在海洋中分布十分广泛,其次生代谢产物具有很好的生物活性,对植物病原菌的生长具有抑制作用[6,9]。本研究结果显示,分离自我国广西北部湾的布雷正青霉、微紫青霉、阿达青霉和短棒曲霉对荔枝霜疫霉菌、炭疽菌具有很好的抑制作用,表现出较好的抗菌广谱性,能延长采后果实的储藏时间。植物内生真菌布雷正青霉的eupenifeldin和布雷菲德菌素A(brefeldin A,BFA)具有抗菌和抗肿瘤等活性[10,11],另外一种化合物咪唑核苷bredinin(BR)可延长移植了肾脏的狗的生存期[12];从南方红豆杉分离的一株内生真菌短棒曲霉F0028产生的2,4二羟基3,5二甲基苯乙酮和棒曲霉素,对灰霉病菌Botrytis cinerea、蔓枯病菌Didymella bryoniae、立枯丝核菌Rhizoctonia solani和终极腐霉Pythium ultimum均有不同程度的抑制作用[13]。但关于海洋布雷正青霉和阿达青霉的活性物质在拮抗植物病原菌方面的研究未见报道。微紫青霉是一种腐生性的半知菌,能产生广谱的裂解酶类,包括纤维素酶、半纤维素酶、木聚糖酶、果胶酶和淀粉酶等;能拮抗、富集并能析出金属盐[14,15],其次生代谢产物对稻瘟菌Magnaporthe oryzae分生孢子和菌丝体的生长具有抑制作用[16];而从海洋真菌微紫青霉分离出来的吲哚碱活性物质shearinines A、D、E可诱导人白血病细胞凋亡[17]。由于海洋真菌具有产生新颖结构、独特生物活性物质的潜力,某些具有抗植物病原菌活性的活性物质可以开发成新型的天然农药,或作为先导化合物开发出新的生物农药以替代目前大量使用的化学合成农药,而避免环境的污染。荔枝褐变由多酚氧化酶(PPO)酶促反应等原因引起[18]。护色是荔枝保鲜工作中需要解决的难题,微生物能产生一些低分子量的活性物质,如酸、醇、过氧化氢和双乙酰等代谢产物,具有较强的络合金属离子能力和较高的抗氧化性,能有效地抑制酶促褐变;同时很多微生物产生的抑菌活性物质对新鲜果蔬有杀菌保鲜作用,如曲霉、青霉和醋酸菌产生的曲酸,可作为抑制剂抑制多酚氧化酶的活性[19,20]。从海洋微生物中寻找无毒、高效的抗褐变活性物质是解决此难题的途径之一。本研究分离鉴定的草酸青霉菌株MF-9可延缓鲜果的褐变,显示MF-9菌株在抗蔬果褐变效果的应用价值。草酸青霉具有溶磷作用,对活性染料具有很好的吸附性能和脱色性能[21],具有抗肿瘤和植物病毒活性[22,23];产生的活性物质可抑制油菜菌核病菌Sclerotiniasclerotiorum、玉米小斑病菌Helminthosporium maydis和小麦白粉病菌Blumeria graminisf.sp.tritici等多种植物病原菌的生长[24~26],但未见草酸青霉抑制水果酶促褐变的研究报道。MF-9菌株延缓鲜果褐变的机理有待进一步探讨研究。我国荔枝的采收季节主要集中在高温高湿的6-8月份,容易滋生霜疫霉菌和炭疽病菌,在高湿情况下会引起大量烂果。近几十年来,荔枝采后果实病害的防治措施主要是化学防治,但是化学防治导致农药残留,影响人类健康。本研究分离纯化的海洋真菌是一类能拮抗霜疫霉菌和炭疽病菌的特殊微生物种群,在控制荔枝病害发生方面显示出良好的应用前景,部分菌株能分泌产生对荔枝果霜疫霉和炭疽病具较高防效的抗菌活性物质。下一步我们将选取抗菌活性强的菌株进行培养条件的优化,从活性强的菌株中提取抗菌活性物质,进行纯化、鉴定,并研究其抗菌机理,为进一步筛选能用于防治荔枝病害的活性物质奠定基础。海洋真菌的筛选及其对离体荔枝果霜霉病和炭疽病的防效@许兰兰$广西科学院生物物理实验室!南宁530007$昆明理工大学生物工程技术研究中心!昆明650233 @黄曦$广西大学农学院!南宁530007 @李昆志$昆明理工大学生物工程技术研究中心!昆明650233 @陈丽梅$昆明理工大学生物工程技术研究中心!昆明650233 @黄庶识$广西科学院生物物理实验室!南宁530007$昆明理工大学生物工程技术研究中心!昆明650233从广西北部湾红树林区的近海海底沉积物与海水样品中分离出64株海洋真菌,以荔枝霜疫霉菌Peronophythora litchii和荔枝炭疽病菌Colletotrichum gloeosporioides为拮抗对象,发现有8株菌株对病原菌菌丝生长有较强的抑制作用,其中菌株MF-3、MF-13、MF-15和MF-16的发酵滤液对荔枝霜疫霉菌的抑制效果较好,菌丝生长抑制率达到94%以上;菌株MF-3和MF-16的发酵滤液对荔枝炭疽病菌抑制效果较好,菌丝生长抑制率均在70%以上。用菌株MF-3、MF-6、MF-8、MF-13和MF-9的发酵滤液进行荔枝离体果防病保鲜试验,结果表明常温下保鲜处理2~4d后,鲜果的褐变指数小于对照组,其中菌株MF-9防褐变效果最好。在26~32℃下,用5株菌的发酵滤液分别浸泡鲜果1d后接种荔枝霜疫霉,3d后菌株MF-6、MF-8、MF-9和MF-13处理的发病率分别是68.3%、71.67%、66.18%和80%,显著低于对照组的87.2%和烯酰玛琳的84.2%(P<0.05),能推迟鲜果晚发病1d。接种炭疽菌3d后,菌株MF-6处理的发病率仅为64.44%,与多菌灵(62.76%)和代森锌(62.54%)效果相当。形态学观察结合分子鉴定,确定菌株MF-3、MF-6、MF-8、MF-9和MF-13分别为布雷正青霉Eupenicillium brefeldianum、微紫青霉Penicillium janthinellum、阿达青霉Penicillium adametzii、草酸青霉Penicillium oxalicum和短棒曲霉Aspergillus clavatonanicus。海洋真菌;;荔枝;;霜疫霉菌;;炭疽病菌;;防治效果[1]彭宏祥,朱建华,秦献泉,等.广西荔枝产业技术现状与前景分析[J].福建果树,2008,(4):45-47. 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D;

2011-05-31

D046_62;D048_73;

许兰兰;

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2011-05-08

荔枝霜疫霉;炭疽病菌;海洋真菌;发酵滤液;疫霉菌;青霉;炭疽菌;Penicillium;Colletotrichum;菌丝生长抑制;

荔枝霜疫霉:5094,海洋真菌:4573,发酵滤液:4314,霜疫霉菌:3232,炭疽病菌:2695,菌丝生长抑制:2657,青霉:1580,Penicillium:1445,棒曲霉:1332,菌株:1111,

7

70K

CNKI:SUN:ZSWF.0.2011-02-012

Y

Y

214-220

D

344

12

1.117672

11

QK0101;

P01;P0204;P0205;P0206;

0.629

D046

D046;

D;

中文;

201102

0001;0752;F0;

研究报告

23512377;23455891;23455890;10687739;10649197;06868882;23512378;

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v.27

10.16409/j.cnki.2095-039x.2011.02.013

ZSWF201102

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海洋真菌:28.5*140.852;海洋微生物:28.5*70.4258;发酵滤液:30.8*126.188;霜疫霉菌:16.2*75.9056;炭疽病菌:9.2*46.7956;荔枝:74.2*380.88;大荔:74.2*380.88;热带及亚热带果:74.2*190.44;霜霉病:4*14.252;离体:9.2*30.0034;防效:8*19.8761;防治效果:6.8*19.708;篇长:9498

海洋真菌;发酵滤液;霜疫霉菌;炭疽病菌;霜霉病;防治效果;

6

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广西科学院

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海洋真菌;霜霉病;

发酵滤液;霜疫霉菌;炭疽病菌;防治效果;

广西科学院生物物理实验室_许兰兰;昆明理工大学生物工程技术研究中心_许兰兰;; 广西大学农学院_黄曦;; 昆明理工大学生物工程技术研究中心_李昆志;; 昆明理工大学生物工程技术研究中心_陈丽梅;; 广西科学院生物物理实验室_黄庶识;昆明理工大学生物工程技术研究中心_黄庶识;;